診斷法角逐 驗糖尿病腎病
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糖尿病腎病(DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的嚴重併發症之一。隨着糖尿病發病率的增加,DN患者日益增多,因其發病隱蔽,進展緩慢,如果任其發展,當臨牀上出現持續性蛋白尿時,腎臟病變已不屬早期,腎臟已出現了不可逆的病變,再用藥物也無法逆轉。因此,早期發現糖尿病腎病有其十分重要的意義。現簡要介紹三種糖尿病腎病的早期實驗診斷方法。
一、尿微量白蛋白檢測
(一)方法:競爭酶聯抑制法。
(二)實驗步聚:
1、用撲克制的抗菌素人白蛋白包被塑料板。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品,37℃溫育30分鐘。
3、加入底物溶液和終止液,通過酶標儀比色,即可算出待測標本濃度。
(三)結論:
此法快速簡便,非常適合臨牀常規使用。但是其缺點是DM患者中尿微量白蛋白的陽性率較低,在Ⅱ型糖尿病病人中,陽性率不足20%。
二、尿銅藍蛋白檢測
(一)方法:酶聯免疫吸附測定法。
(二)實驗步驟:
1、銅藍蛋白抗體包被,冰箱過夜。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品,37℃溫育1小時。
3、加入酶標銅藍蛋白抗體,37℃溫育1小時。4、加入底物溶液和終止液,在酶標儀上讀取A值,即可算出待測標本濃度。
(三)結論:
該方法進行了精確性和穩定性實驗,方法比較穩定可靠。並對114名DM患者的尿銅藍蛋白含量及尿微量白蛋白含量進行相關分析,兩者呈正相關,且在尿微量白蛋白陰性的糖尿病病人中,仍有49、5%的病人尿銅藍蛋白陽性。因此,尿銅藍蛋白質檢測很有可能成爲DN早期的較第三診斷指標。
三、尿白蛋白片段的檢測
(一)方法:免疫印跡法。
(二)實驗步驟:
1、尿樣與樣品處理液等量混合,置沸水浴3分鐘。2、聚丙烯酰胺凝膠電泳,每孔加樣20μι,電壓200V。3、將膠上的蛋白帶轉印到硝基纖維素膜上,轉印電流340mA,2小時後取出,封閉1小時。4、加入白蛋白抗體和酶標白蛋白,冰箱過夜。5、加入顯色液,出現蛋白帶爲陽性,未見蛋白帶爲陰性。
(三)結論:
通過實驗得出凡是尿白蛋白陽性者,尿白蛋白片段也爲陽性,而尿白蛋白陰性者中,仍有30%爲尿白蛋白片段陽性。曾有人對後者進行隨訪觀察,發現他們中有18%發展爲尿白蛋白,蛋白陽性。因此,認爲尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率,能更早地發現DN患者。
綜上所述,除尿微量白蛋白檢測是目前人們較爲公認的DN早期診斷指標外,其它兩種都還在觀察及研究中。目前國內外還沒有建立尿銅藍蛋白酶聯免疫測定方法,市場上買不到試劑盒,其作用機理還待於進一步深入研究。免疫印跡法分析尿白蛋白片段,在我院已應用於臨牀,對尿白蛋白陰性者,再用本法檢測分析,可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診,是預測腎臟病變的更爲早期,更爲靈敏的指標。
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