艾滋病的檢測大致分爲兩大類
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目前檢測HIV的方法有100多種,可以分爲抗體檢測和病毒檢測兩大類。
病毒檢測:包括細胞培養(病毒分離)、p24抗原檢測和病毒核酸檢測。早期對HIV的診斷主要是通過血清學試驗檢測抗艾滋病的抗體,間接地診斷HIV感染。隨着生物科技的發展,近年來分子生物學方法不斷被應用到HIV的檢測中,尤其核酸檢測已經成爲了HIV實驗室診斷的發展方向,它可直接檢查HIV RNA,可在發現血清學變化之前檢測艾滋病感染,而且比P24抗原檢測方法更靈敏。
抗體檢測:艾滋病抗體一般在人感染後幾周逐漸出現,可延續至終生,血清學試驗分爲初篩和確認試驗。最常用的初篩試驗和確認試驗分別是酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡試驗(WB)。常規實驗方法:酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡試驗(WestBlot)、間接免疫熒光法(IFA)。快速檢測方法:明膠顆粒凝集試驗、斑點免疫結合試驗、P24抗原的檢測、分子生物學方法、RT?PCR檢測法、熒光實時PCR檢測技術、支鏈DNA(bDNA)、連接酶酶促鏈式反應(LCR)、核酸序列依賴性擴增(NASBA)、轉錄介導的擴增(TMA) 。
【病毒感染機制】
HIV病毒侵入人體後,其表面糖蛋白gp120與細胞表面受體蛋白CD4以高親和力結合,吸附到宿主細胞上;gp120再與宿主細胞表面輔助受體相互作用,使病毒與宿主細胞膜更接近;gp41產生一系列構象變化,其N端的融合肽片段插入宿主細胞膜,導致病毒包膜與細胞膜的最終融合,病毒RNA進入細胞。在HIV感染後,最先能夠監測到病毒RNA、然後是p24抗原,最後是抗體。常見的檢測如下:
1.血液檢查:
A) 血常規:常有紅細胞,血紅蛋白降低,呈輕度正色素、正細胞性貧血。白細胞常降至4.0×109/L以下。分類中性粒細胞增加,有核左移現象。少數表現爲粒細胞減少。淋巴細胞明顯減少,多<1.0×109/L 。有漿細胞樣淋巴細胞和含空泡的單核細胞出現。血小板一般無變化,一旦有變化,血小板可明顯減少。
B) β2 -微球蛋白和新蝶呤(neopterin) 用放射免疫法(RIA)測定血清β2微球蛋白和新蝶呤。它們是被激活的巨噬細胞的產物,其血清水平的升高意味着免疫激活,具有與CD4 T細胞絕對計數、淋巴細胞百分率、CD4/CD8細胞比例下降同樣的臨牀意義,即預示病情進展至獲得性免疫缺陷綜合徵。
2.免疫系統檢測:
(1)淋巴細胞亞羣檢查:CD4 T細胞減少,CD4/CD8比例下降,正常人CD4/CD8之比爲1.75~2.1,而獲得性免疫缺陷綜合徵患者常<1.0。
(2)T細胞功能下降:遲髮型變態反應性皮試陰性。體外非特異性有絲分裂原刺激時,淋巴細胞轉化降低。T細胞的細胞毒作用降低。T細胞產生白細胞介素-2和干擾素γ減少。
(3)B細胞功能失調:有不同程度的免疫球蛋白及免疫複合物升高。出現自身抗體,如產生RF、抗核抗體和抗淋巴細胞抗體等。
(4)自然殺傷細胞活性下降。
(5)淋巴結活檢:在獲得性免疫缺陷綜合徵的高發地區及高危人羣中,對腹股溝以外部位的淋巴結腫大,特別是持續性頸部淋巴結腫大的人普遍進行淋巴結活檢是重要的措施,可見到淋巴結的反應性病變和腫瘤性病變等非特異的、但具有一定診斷價值的病理表現。有的獲得性免疫缺陷綜合徵患者,表淺淋巴結消失,不易做活檢。
3.其他 小便檢查常有蛋白尿。血中肌酸酐和尿素氮可升高。
4.病原學檢查
(1)HIV-1的病原學檢查:
A) HIV-1血清抗體的檢測:包括抗-gp120及抗-P24,大多數HIV-1感染者在3個月內血清抗體陽轉。因而,測定血清抗體是目前確定有無HIV感染的最簡便、快速而有效的方法。常用方法有酶聯免疫吸附試驗(ELISA),間接免疫熒光測定(IFA),放射免疫試驗(RIA)等。一般多用ELISA法作初查,其靈敏性爲99.5%。但由於它是用HIV-1作爲抗原進行檢測,與淋巴細胞抗原有交叉抗體,可有假陽性出現。故對初查陽性者,再用硝酸纖維膜免疫印跡試驗(Westen blot,WB)確認。
硝酸纖維膜雜交試驗特異性強,假陽性率極低。其診斷標準是:如ELISA連續兩次陽性,且WB檢測出現p24,gp41,gp120或gp160條帶中任何兩條條帶陽性者,則可確認爲HIV感染。如沒有兩條條帶陽性者,則只能診爲“未定型”(indeterminate pattern)。這時可用聚合酶鏈反應(PCR)檢測其特異的病毒核酸,或繼續密切觀察,反覆作上述檢測,以明確診斷。
B) 檢測病毒抗原:由於抗體出現晚於抗原,因而不能早期診斷。如果在抗HIV-1陽轉之前的窗口期篩選獻血員,就會出現假陰性,後果是非常嚴重的。因此,篩選獻血員最好加測病毒抗原。通常檢測P24,其靈敏性及特異性均較高。既有助於早期診斷,也可用於獻血員篩選、藥物療效考覈等。
C) 檢測病毒核酸:在抗HIV-1陽轉之前的窗口期,還可用反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測HIV RNA。此法靈敏度更高,檢測週期短,也有助於早期發現、獻血員篩選、藥物療效考覈等。但操作必須十分小心,防止污染,以避免假陽性。
D) 病毒分離和培養:從患者的淋巴細胞、血液、精液及其他體液中均可分離出病毒,陽性率較高,反覆多次分離陽性率可達100%。分離的病毒可用CD4 T細胞培養。但方法複雜,成本較高,一般只用於實驗室研究。分離或培養到HIV均爲確診的依據。
(2)HIV-2的病原學檢查:血清學檢查發現約80%的HIV- 1和HIV-2感染之間存在交叉反應。故用於檢測HIV-1感染的ELISA和RIBA法難以確定HIV-2感染。特別是發生了HIV-l和HIV-2雙重感染時,使診斷更爲困難。不過,HIV-2特異的ELISA及WB法藥盒現已有商品出售。在HIV-2流行區,可在檢測HIV-1的基礎上,先用HIV-2特異的ELISA藥盒區別HIV-1和HIV-2感染,再用HIV-2特異的WB法作確認試驗。在非流行區,當HIV-1試驗陽性或弱陽性,而WB法不明確或陰性,或臨牀懷疑獲得性免疫缺陷綜合徵,而HIV-1試驗弱陽性、WB法陰性時,也要用HIV-2特異的ELISA藥盒檢測,以明確診斷。
近來爲了節省時間和經費,大部分試劑盒廠家和血庫採用HIV-1和HIV-2抗體聯合測定。聯合測定的ELISA模式與HIV-1抗體測定相同,不同的是在包被固相載體時用HIV-1和HIV-2二種抗原的混合物替代單一的HIV-1抗原。
【併發症相關檢測】
本病極易併發機會性感染和惡性腫瘤,並常死於這些併發症。因此,對本病患者進行胸部及胃腸道X線檢查,及早作出機會性感染和惡性腫瘤的診斷,對及時治療和延長患者的生命是十分重要的。
1.消化道X線檢查 胃腸道機會性感染主要的病原體是鉅細胞病毒,惡性腫瘤仍以卡波齊肉瘤爲常見。
(1)鉅細胞病毒感染:鉅細胞病毒可侵犯胃腸道的任何部位,但以結腸最爲常見,個別病例可累及整個胃腸道。鉅細胞病毒性食管炎或胃炎在X線片上表現爲黏膜皺襞腫脹,小的充盈缺損及淺表潰瘍或糜爛等。鉅細胞病毒性結腸炎病變有散在性及局竈性兩種。散在性者病變侵犯整個胃腸道,但程度不一。鋇灌腸示結腸袋形消失,腸腔輕度狹窄,腸黏膜可有肉芽腫、糜爛及淺表潰瘍等。節段性者以侵犯盲腸及末端迴腸爲主。X線造影顯示盲腸痙攣,黏膜皺襞不規則增厚及表淺的鵝口瘡樣潰瘍,但應與潰瘍性結腸炎和克羅恩病的X線表現相鑑別。上述X線表現均爲非特異性的,應結合臨牀資料進行分析。必要時應配合內鏡加活檢以確診。
(2)卡波齊肉瘤:卡波齊肉瘤可發生在胃腸道的任何部位。食管卡波齊肉瘤在X線片上顯示食管中段呈多發性腔內息肉樣病變。胃卡波齊肉瘤表現爲胃遠端散在性、多發性無蒂的黏膜下缺損,輪廓光滑,直徑幾毫米至幾釐米。少數病變中央有鋇劑積聚,顯示“牛眼徵”,在充氣擴張的胃內還可見不規則增厚的黏膜皺襞。十二指腸卡波齊肉瘤爲球部內黏膜下結節或輕度斑片狀隆起。小腸卡波齊肉瘤爲多發性結節伴中央潰瘍。結腸卡波齊肉瘤以直腸最明顯,表現爲整個結腸黏膜下散在的結節狀充盈缺損,直徑幾毫米至幾釐米不等。較晚期患者結節融合和環形浸潤腸壁,使直腸狹窄和僵直。
2.胸部X線檢查 常見的機會性感染有卡氏肺孢菌肺炎,惡性腫瘤有卡波齊(Kaposi)肉瘤。
(1)卡氏肺孢菌肺炎:典型X線表現是:初起時兩肺先出現混合性肺泡及間質炎性改變,以肺門周圍散在性網狀結節樣間質浸潤爲主,從肺門向外擴展。隨後在數日內病變進入肺泡,發展成肺泡性實變,在肺野內形成均勻斑片狀實變影,其間夾雜有廣泛性或局竈性肺氣腫或小段肺不張,以肺外圍最明顯。呈粗糙的或細顆粒狀的“毛玻璃樣”表現,病變可僅限於一個肺葉,也可瀰漫分佈。有時片狀陰影可融合成大片狀均勻緻密的浸潤影,呈向心性分佈,與肺水腫的X線特徵很相似。也可在“毛玻璃樣”背景上出現結節狀病竈。在肺周圍還可有條狀陰影,有些則僅表現爲粗結節陰影。但這些X線表現沒有特異性,確診需要反覆經纖維支氣管鏡檢找到病原。不典型X線表現有:肺大葉性實變,可一葉也可多葉實變;肺空腔形成或胸腔積液;肺泡內滲出物亦可鈣化等。應注意與肺結核或肺部真菌感染相鑑別。胸內淋巴結增大,主要是位於縱隔、右氣管旁及兩側肺門的淋巴結增大。有的病例甚至無呼吸系統症狀出現,而僅於X線片上顯示胸內淋巴結增大,以後才被證實爲獲得性免疫缺陷綜合徵。此種X線表現強烈提示肺內有嚴重感染或腫瘤存在,需作纖維支氣管鏡或淋巴結活檢。
(2)卡波齊肉瘤:最常見的X線異常是肺間質浸潤,約佔肺卡波齊肉瘤患者的80%。此外,可見肺野內直徑<1cm的、境界不清楚的多發性小結節影及明顯的條狀陰影。常伴有縱隔及肺門淋巴結增大,也可有胸腔積液。當X線表現不明顯時,CT檢查有助診斷。
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